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幽門(mén)螺桿菌檢測的進(jìn)展
1983年澳大利亞學(xué)者M(jìn)arshall等首次從胃炎患者的胃粘膜中分離出一種螺旋彎曲桿菌(后被命名為幽門(mén)螺桿菌),引起了廣泛關(guān)注和研究。由于檢測手段的不斷進(jìn)步和發(fā)展,提高了臨率診治胃十二指腸疾病的水平,更新了人們對胃十二指腸疾病的傳統觀(guān)念和認識。
1 幽門(mén)螺桿菌的研究現狀
該菌從形態(tài)學(xué)上看,在體內呈螺旋桿狀,在體外培養呈彎桿狀,故被正式命名為幽門(mén)螺桿菌。1990年8月的悉尼國際胃腸會(huì )議肯定了幽門(mén)螺桿菌與慢性胃炎(CG)消化性潰瘍(PU)的關(guān)系。實(shí)驗證明,此菌的存在與病變程度有密切聯(lián)系。在一些胃十二指腸疾病中幽門(mén)螺桿菌感染率很高,檢出率為58%——100%.有人通過(guò)對胎兒、新生兒、嬰幼兒、正常人免疫學(xué)及細菌學(xué)的研究認為,人體胃粘膜出現幽門(mén)螺桿菌是外源性感染方式,人與人及人與動(dòng)物之間的傳染是幽門(mén)螺桿菌的可能傳播途徑。城市人口感率高于農村人口,澳大利亞土著(zhù)人的幽門(mén)螺桿菌感染率顯著(zhù)低于隨機挑選的獻血員。揭示密切的社會(huì )接觸有利于幽門(mén)螺桿菌感染的流行。幽門(mén)螺桿菌感染的致病機理至今尚未完全闡明。賈博琦認為,可能是隱性感染過(guò)程,即在幽門(mén)螺桿菌浸潤下,胃粘膜充血、水腫造成幽門(mén)螺桿菌生長(cháng)的適宜環(huán)境,幽門(mén)螺桿菌借機侵入粘膜下層生長(cháng)繁殖,并逐漸發(fā)展為慢性炎癥或潰瘍。
張振華等認為,幽門(mén)螺桿菌對人感染過(guò)程分為3個(gè)階段:①幽門(mén)螺桿菌借其螺旋狀菌體及其結構的特征,穿透粘膜表面的不溶性粘液層;②借幽門(mén)螺桿菌表面菌毛樣網(wǎng)狀結構與胃粘膜上皮表面相應的受體結合,在胃壁穩定持續地定居;③再由幽門(mén)螺桿菌的LPS或其它的細胞毒素引起胃粘膜非特異性炎癥。在此基礎上再加上胃酸、胃蛋白酶的作用造成炎癥或潰瘍。Morgan通過(guò)對幽門(mén)螺桿菌的流行病學(xué)、細菌學(xué)、病理學(xué)、病因學(xué)、臨床診斷學(xué)與藥物治療等方面進(jìn)行的研究證實(shí)45%的幽門(mén)螺桿菌有細胞損害作用。幽門(mén)螺桿菌含有多種生物化學(xué)損傷因子:①幽門(mén)螺桿菌含類(lèi)脂多糖脂肪酸A,它具有Gram陰性菌的內毒素特性;②有豐富的尿素酶活性,它分解尿素成NH4+與CO2,而NH4+可破壞粘膜屏障,使跨膜電位發(fā)生改變,引起細胞通透性增加,H+逆相擴散,產(chǎn)生糜爛和潰瘍。③幽門(mén)螺桿菌有蛋白分解酶,將高分子的粘液分解為低分解為低分子物,使粘度減低,不能阻止H+逆相擴散。④幽門(mén)螺桿菌感染染致免疫反應,在急性活動(dòng)期,局部出現炎癥細胞浸潤(中性多核為主),在慢性期,局部出現淋巴細胞,漿細胞浸潤和SIgA及SC為主。⑤幽門(mén)螺桿菌增強活性氧的生成而介導粘膜損害。從組織學(xué)觀(guān)點(diǎn)看幽門(mén)螺桿菌感染加重了洗動(dòng)性胃炎、中性粒細胞浸潤、破壞腺體導致萎縮性胃炎。也可損害胃排空而促進(jìn)潰瘍形成。總之幽門(mén)螺桿菌的存在及其致病性已不容置疑,關(guān)鍵在于提高對幽門(mén)螺桿菌的檢測水平,針對病因進(jìn)行有效治療并通過(guò)對幽門(mén)螺桿菌的臨測指導臨床治療。
2 幽門(mén)螺桿菌檢測的進(jìn)展
幽門(mén)螺桿菌的檢測方法目前已有尿素酶試驗、細菌培養、活檢標本切片染色、直接涂片染色、14C呼試驗及免疫學(xué)方法等各種測定法。權衡利弊各有優(yōu)缺點(diǎn)。
2.1 幽門(mén)螺桿菌檢測的進(jìn)展:尿素酶試驗
該試驗是所有檢測手段中最為簡(jiǎn)便迅速的一種方法,在胃鏡檢查同時(shí)進(jìn)行,敏感性和特異性分別達91%和100%時(shí),數分鐘即可做出診斷。檢查結果與直接涂片法、分離培養法、組織病理學(xué)結果一致或近似。活檢標本的尿素酶活性主要與感染的數量多少有關(guān),量少時(shí)可能造成假性反應,而其它產(chǎn)生尿素酶的細菌也可能造成假陽(yáng)性,但仍不失為一種最初檢測幽門(mén)螺桿菌感染的有效手段。
2.2 幽門(mén)螺桿菌檢測的進(jìn)展:細菌培養
胃粘膜組織的細菌培養是診斷幽門(mén)螺桿菌感染的最可靠方法,往往做為驗證其它檢測手段的“金標準”.但不少因素可能會(huì )影響幽門(mén)螺桿菌的培養而致假陰性。如:胃粘膜組織中的幽門(mén)螺桿菌的數量過(guò)少、細菌繁殖能力差等。
2.3 幽門(mén)螺桿菌檢測的進(jìn)展:活檢標本切片染色
將胃粘膜活檢組織標本用100%中性福爾馬林固定,常規石蠟包埋、切片染色。染色的方法有很多種,主要有Warth-Starry(W-S)染色,改良Giemsa染色,Gresyefast,HE和熒光染色,其中(W-S)染色效果最好,細菌清晰易辨,特異性和敏感性幾乎均達100%.但該法繁瑣且需一定技術(shù)。此外HE染色法既可供組織學(xué)運用又可檢查幽門(mén)螺桿菌。也可做為一種常規檢測方法。Langdale-Brown等報道用吖啶橙熒光染色,幽門(mén)螺桿菌易辨認,且方法簡(jiǎn)單、快速,尤其在幽門(mén)螺桿菌量少時(shí)優(yōu)于W-S和Giemsa染色,不易漏診。
2.4 幽門(mén)螺桿菌檢測的進(jìn)展:直接涂片染色
Pinlard用相差顯微鏡直接檢查涂于玻璃片上的胃粘膜查幽門(mén)螺桿菌,敏感性達100%.
2.5 幽門(mén)螺桿菌檢測的進(jìn)展:13C14C呼吸試驗
有人利用幽門(mén)螺桿菌產(chǎn)生的尿素酶能分解尿素的原理,將胃內用核素標記的尿素分解產(chǎn)生CO2和NH2,CO2被吸收后經(jīng)肺排出,如果胃粘膜有幽門(mén)螺桿菌存在,則呼出氣中就有核素標記的CO2出現。檢測幽門(mén)螺桿菌的敏感性和特異性分別達到100%和88%,幽門(mén)螺桿菌清除后14CO2呼出減少。Ormand等發(fā)現收集服用核素標記的尿素后20min的呼氣體即可有效地檢測幽門(mén)螺桿菌感染。
2.6 幽門(mén)螺桿菌檢測的進(jìn)展:免疫學(xué)方法
佐貫等采用乳膠凝集試驗檢測血中抗幽門(mén)螺桿菌IgG抗體,并與組織培養法和鏡檢法進(jìn)行對照,血中抗幽門(mén)螺桿菌抗體與粘膜內幽門(mén)螺桿菌檢出一致率為73.1%,特異性為60%——100%,敏感度為81.3%,對幽門(mén)螺桿菌感染的篩選診斷具有一定的實(shí)用價(jià)值。Rathbone等用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定73例經(jīng)胃鏡檢查并活檢確診的患者血清幽門(mén)螺桿菌抗體,發(fā)現其敏感性和特異性分別達到93%和97%.Engstrand等建立了檢測幽門(mén)螺桿菌的單克隆抗體方法,為診斷幽門(mén)螺桿菌感染提供了更為特異的方法。張啟波等利用初步純化的幽門(mén)螺桿菌的尿素酶為抗原對120例病人的血清抗幽門(mén)螺桿菌抗體進(jìn)行了ELISA測定,對照細菌培養等方法顯示敏感為95%,特異性為91%.吉林市第222醫院用血清免疫熒光方法診斷幽門(mén)螺桿菌感染,顯示很高的敏感性。浙江醫科大學(xué)用親和素一生物素(**)法檢測活檢組中的幽門(mén)螺桿菌抗原,可顯著(zhù)提高診斷的靈敏性。
2.7 幽門(mén)螺桿菌檢測的進(jìn)展:其它
Sehneider等報道,讓患者吞入系線(xiàn)膠囊以收集胃內粘液,再通過(guò)涂片和尿素酶試驗檢測粘液內的幽門(mén)螺桿菌,發(fā)現其特異性、敏感性也很高。郎大裕等用一種添加了尿素的pH指示劑的酚紅,使幽門(mén)螺桿菌染色,通過(guò)內鏡觀(guān)察幽門(mén)螺桿菌在人胃內的分布情況,應用本法的30例胃潰瘍患者中26例色素撒布后立即可以見(jiàn)到發(fā)紅現象。全部病例都可在發(fā)紅的部位檢出幽門(mén)螺桿菌。
3 幽門(mén)螺桿菌檢測的展望
為克服幽門(mén)螺桿菌檢測中的假陽(yáng)性結果,中山醫科大學(xué)與澳大利亞學(xué)者合作探討了血清學(xué)與尿素呼氣試驗診斷幽門(mén)螺桿菌感染的價(jià)值,在血清學(xué)試驗中對接近界限值的陽(yáng)性血清再增加一個(gè)空腸彎曲菌吸收試驗,可提高血清學(xué)診斷的特異性,呼氣試驗的敏感性為98.7%,特異性為97.1%,并能準確測定幽門(mén)螺桿菌陰轉及復發(fā)或再感染,可望成為抗幽門(mén)螺桿菌治療的藥物篩選及療效監測的重要手段。Megraud等用DNA雜交技術(shù)檢測幽門(mén)螺桿菌,從理論上講其特異性好,有發(fā)展前途,但目前尚不能應用于活檢標本的幽門(mén)螺桿菌檢測。
綜上所述,幽門(mén)螺桿菌感染與胃十二指腸疾病的關(guān)系已證明,隨著(zhù)醫學(xué)研究的不斷深入幽門(mén)螺桿菌的檢查方法也將不斷取得突破性進(jìn)展。
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